91香蕉app下载安装最新版Logo
快速訂購 快速訂購: English 中文版

新聞中心/NEWS

全國免費谘詢熱線

400-921-8278

新品推薦

產品新聞
北京香蕉视频下:抗體亞型鑒定的原理及實驗步驟​‍
時間:2019-06-28    瀏覽:   【 打印此頁】  【 關閉


不同亞型的抗體在結構上有所區別,其免疫源性與在體內發揮的作用存在差異,對抗體進行進一步的細分,並進行抗體亞型鑒定,對於疾病作用機理的研究、抗體藥物的開發有重要意義。那麽什麽是抗體亞型鑒定?眾所周知,亞型指的是相同的構成方式,但是空間結構不同的蛋白質結構。抗體亞型,指的是在機體內產生的“Y”構型的免疫球蛋白(Ig),基於小分子多肽結構上的差異,可以進一步的進行細分。相關抗體亞型鑒定有:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgM,IgA 的鑒定。
 

 抗體亞型鑒定
 

抗體亞型鑒定原理:

 

抗體亞型鑒定的原理是利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類(可區分出 IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板,與加入的培養上清中的小鼠抗體結合,再加入HRP 標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應,最後用 TMB 底物係統顯色並用稀硫酸終止,再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。

 

實驗步驟:

 

1 、首先將ELISA試劑盒恢複室溫(大約30分),然後用純水把清洗液配成工作濃度(1份濃縮清洗液加19份純水)。

 

2 、取出酶標板。每個標本需要6孔,陽性對照6孔,陰性對照6孔。多餘的用自封袋保存,記得放入幹燥劑。

 

3 、將標本檢測孔每孔先加入標本稀釋液各50μl。然後將50μl 細胞培養上清(或特異親和純化的抗體)再加入酶標微孔板,每個標本加6孔;陽性對照和陰性對照孔不加標本稀釋液也是各加6孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鍾。

 

4 、棄去板內液體,洗板5遍後在不掉纖維的吸水材料上拍幹或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl,通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鍾。

 

5 、吸棄板內液體,洗板5遍後在不掉纖維的吸水材料上拍幹或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑 A 和顯色劑 B 各50μl,換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鍾。

 

6 、ELISA試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結果,看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的 Ig 類或亞類。更可將反應終止液(每孔50μl)終止反應後用酶標儀450nm 測長,630nm 參考波長雙波長測定結果,參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的 Ig 類或亞類(陽性對照 OD 一般不小於0.8,陰性對照一般不高於0.15,陽性判定標準:樣品 OD 大於陰性 OD+0.15,陰性 OD 低於0.05按0.05算)。

 

注意事項:

 

1、雖然本試劑盒過期後很久還有使用價值但還是請您在有效期內使用。

 

2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬,雖然可以分辨但並不建議您這樣做。此類樣品成分十分複雜,有幹擾結果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的 BF06004小鼠單抗 Ig 類/亞類鑒定用酶標二抗套裝。它會給您帶來滿意的結果,同時您也可以使用抗原包被板來解決此類問題。

 

3、手洗板子時一定要把孔加滿,停留10秒然後棄盡,最後要拍幹淨。特別是在酶標二抗溫育後洗板時一定要把酶吸出而不是甩出,要吸淨。這個在手工洗板時對結果很重要。

 

4、一次沒用完的板子要帶幹燥劑放自封袋封好,隨盒存放。

 

5、拿放板子時不要劇烈抖動,以免孔間交叉汙染出現錯誤結果。

 

6、本試劑一般不會出現兩個陽性,但出現兩個陽性的現象不論在進口或國產試劑中都是真實存在的,一般會一個 OD 很高,另一個很低但卻還能判為陽性,實驗分析表明這種情況下以 OD 高值孔為準,出現這種情況有多重原因:1、培養的細胞中有飼養細胞殘留,2、抗體本身存在變異, 3、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水,4、上清出現少量汙染,5、實驗操作粗放,6、加錯試劑。

 

7、通用陽性對照數據並不一定完全一樣,僅作為試劑有效指示。


北京香蕉视频香蕉视频免疫技術有限公司是由留學歸國人員創辦的生命科學領域高新技術企業,服務內容涵蓋抗體製備免疫檢測細胞免疫病毒包裝免疫佐劑細胞冷存等領域,谘詢電話:0512-68216582。





相關文章推薦:
1、北京污香蕉视频:單克隆抗體製備的原理和步驟​‍
2、弗氏佐劑/福氏佐劑的作用機製和使用方法​‍
3、水佐劑:快速製備小鼠單克隆/多克隆抗體​‍
4、北京香蕉视频香蕉视频:反轉錄實時熒光定量檢測體係(染料法)


 

聯係香蕉视频下
北京香蕉国产成版人视频app免疫技術有限公司
地址:北京市海澱區清河三街95號同源大廈1132室(總部)
電話:400-921-8278
聯係人:劉經理
手機:13552826508 / 13552713240
北京香蕉国产成版人视频app微信公眾號
掃一掃關注香蕉国产成版人视频app

Copyright © 2018 北京香蕉视频下免疫技術有限公司 版權所有 京ICP備12031038號-2 

佐劑 細胞凍存液 抗體製備 慢病毒包裝 免疫檢測